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      小鼠elisa試劑盒在試驗中以下幾點至關重要

      瀏覽次數:26發布日期:2022-05-29
        
        小鼠elisa試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人心型脂肪酸結合蛋白(h-FABP)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人心型脂肪酸結合蛋白(h-FABP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
        小鼠elisa試劑盒在試驗過程中這幾點非常重要:
        1、重要的洗刷:
        不充分的洗刷會導致差異和高布景,從而帶來不抱負的試驗結果。假如未結合的材料殘留在微孔板中,那么它會添加布景噪音。有必要的話,可添加洗刷液中的鹽濃度,這會阻止非特異結合反響。假如布景過高,置疑洗刷不行時,能夠測驗添加洗刷次數。
        2、關鍵的關閉:
        關閉液的作用是讓不相關的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產生信號的抗體非特異結合的時機。假如布景過高,置疑關閉不充分,那么能夠測驗運用更高濃度的關閉液,或適當延伸關閉時間。
        現在主要有兩種類型的關閉液:蛋白和非離子型去污劑。ELISA試劑盒運用的類型須取決于多個因素,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、抗體和檢測試劑。好的關閉液應降低非特異性結合,但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發生相互作用。
        3、抗體濃度須優化:
        假如試劑稍有不同,則或許需求優化抗體的量。非特異的抗體結合會添加布景。為了防止這一點,切勿運用過多的一抗或二抗。
        4、檢測試劑要適量:
        切勿運用過多的檢測試劑。假如濃度過高,ELISA試劑盒或許未正確稀釋,則會導致高布景。也不要顯色過度,如有必要,優化一下何時應加入終止液。
        只要確保每一步操作都做到位,才會出現的試驗結果。所以ELISA試驗的每一步都很重要,不能夠漫不經心。
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